興奮劑檢測(cè)

  
在體育比賽中，有些運(yùn)動(dòng)員為了爭取取得好名次、提高成績，常服用一些藥物，企圖憑借藥物作用獲得榮譽(yù)。這種做法損害了體育運(yùn)動(dòng)的本來目的，也違反了奧林匹克公平競賽的原則。同時(shí)，因藥物的毒副作用嚴(yán)重地威脅著運(yùn)動(dòng)員的身體健康，國際奧委會(huì)（IOC）明文規(guī)定禁止運(yùn)動(dòng)員服用某些藥物，并自1968年起在奧運(yùn)會(huì)比賽中對(duì)運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行“濫用藥物”的檢測(cè)，若查出他已服用，便立即取消其參賽資格及所得名次。由于最早服用的藥物多為興奮性藥物——刺激劑類，所以盡管以后也禁用了其他類型的藥物，但在我國則常常將所有的禁用藥物統(tǒng)稱為“興奮劑”，有關(guān)的檢測(cè)工作則統(tǒng)稱為“興奮劑檢測(cè)”。正確的叫法應(yīng)為“濫用藥物”及“濫用藥物檢測(cè)”，分別對(duì)應(yīng)于英文“doping”和“doping control”。為方便起見，本文仍使用“興奮劑”一詞，即包括所有的禁用的濫用藥物?！?nbsp;

一 服用藥物歷史

在競賽中服用各種物質(zhì)以求獲得優(yōu)勢(shì)的做法已有多年歷史。早在公元前600年，古羅馬的斗士就使用過刺激劑。公元前3世紀(jì)，希臘人也曾服用過蘑菇以求提高成績。19世紀(jì)80年代在法國的自行車600km比賽中發(fā)生過運(yùn)動(dòng)員因服用藥物而死亡。1910年已開始對(duì)參賽馬匹的唾液進(jìn)行藥物檢查。在1960年，羅馬奧運(yùn)會(huì)上發(fā)生了丹麥自行車運(yùn)動(dòng)員Kurt EnemarKnud Jensen因服用苯丙胺類而死亡的事件。在1967年，環(huán)法自行車賽中英國的運(yùn)動(dòng)員Tommy Simpson也因服用苯丙胺藥物而喪生。這些事件促使了國際奧委會(huì)醫(yī)學(xué)委員會(huì)對(duì)1968年第19屆奧運(yùn)會(huì)開始實(shí)行藥物檢查。當(dāng)時(shí)禁用的藥物只有8種，檢測(cè)方法是氣相色譜（氫焰離子化檢測(cè)器）法和薄層色譜法等。1972年第20屆奧運(yùn)會(huì)時(shí)，禁用藥物增加至26種，檢測(cè)儀器采用氣相色譜-氮磷檢測(cè)器。1976年，又增加了甾體同化激素一類5種禁用藥物，使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器。1980年公布的禁用藥物為58種，開始采用毛細(xì)管氣相色譜法檢測(cè)。其后1984年增至69種。1988年再增加β-阻斷劑和利尿劑類藥物，總數(shù)達(dá)100種。1991年增加一類多肽，1994年12月IOC公布的禁用藥物共分為七類，計(jì)108種。有關(guān)歷屆奧運(yùn)會(huì)檢測(cè)運(yùn)動(dòng)員數(shù)目及陽性結(jié)果列于表1。

表1　 歷屆奧運(yùn)會(huì)的藥物檢測(cè)結(jié)果


*其中1金牌，1銀牌，2銅牌子　 **其中3金牌，1銅牌

二 禁用藥物

1995年禁用的藥物，按其性質(zhì)可分為7類（見表2），分述如下：

表2禁用藥品名單（1994，12）

注意：該表并非禁用物質(zhì)的詳盡無遺的一覽表。僅向讀者提供一個(gè)較為綜合的禁用物質(zhì)一覽表，于該擴(kuò)展表中沒有出現(xiàn)的許多物質(zhì)按“及相關(guān)物質(zhì)”術(shù)語被認(rèn)為禁用。




　


  

1.刺激劑 這類藥物共有41種。它們通過神經(jīng)系統(tǒng)的作用，增強(qiáng)人的精神與體力。其副作用是導(dǎo)致過度興奮與焦慮，進(jìn)一步影響判斷力而容易受傷，心率及血壓會(huì)急速上升，有可能造成脫水、腦溢血及心臟病發(fā)作。上述兩例運(yùn)動(dòng)員的死亡就是服用這類藥物引起的。這類藥物中含咖啡因，奧委會(huì)規(guī)定尿中咖啡因含量超過12μg/ml才算違禁。

2.麻醉劑 這類藥物共有10種。服用后可產(chǎn)生痛快感及心理亢奮，并能降低痛感，以致在參賽中造成更嚴(yán)重的傷害。這類藥物多有成癮性，會(huì)引起很多生理及心理問題。

3.合成類固醇及β2激動(dòng)劑 這類藥物共27種。合成類固醇又稱甾體同化激素，是雄性激素衍生物。這類藥物具有增長肌肉的作用，為很多運(yùn)動(dòng)員口服或注射使用，但副作用也很嚴(yán)重，會(huì)干擾人體的自然激素平衡，男人服用后會(huì)發(fā)生抑制雄性激素分泌，睪丸縮小，胸部擴(kuò)大，早禿等現(xiàn)象；女人服用后，會(huì)發(fā)生男性化，肌肉增生，月經(jīng)失調(diào)，毛發(fā)增多等現(xiàn)象。有些作用還是不可逆的。過多地使用這類藥物還會(huì)引起嚴(yán)重的肝、腎損傷、并發(fā)肝癌及心臟病癥等。這類藥物中的睪酮是人體自然分泌的一種激素，所以規(guī)定要測(cè)定睪酮與其異構(gòu)體表睪酮之比值，大于6時(shí)可判斷為使用了此類藥物。另有幾種β2激動(dòng)劑，據(jù)認(rèn)為也有類似作用。

4.β-阻斷劑 這類藥物共有12種。原為降低血壓和降低心率的藥物，但同時(shí)具有鎮(zhèn)靜作用。對(duì)于射擊、射箭等項(xiàng)目的運(yùn)動(dòng)員，穩(wěn)定神經(jīng)，提高成績。

5.利尿劑 共13種。這類藥物會(huì)促進(jìn)排尿，使尿液變稀，使禁用藥物在尿中的濃度減小而不易查出。還可使體重下降，因此在一些有體重限制的比賽項(xiàng)目中常有運(yùn)動(dòng)員服用。

6.遮蔽劑 共2種。表睪酮是因?yàn)槭褂煤罂墒共G酮與表睪酮的比值變小，從而遮蔽了睪酮的違禁使用。另一藥物丙磺舒則在服用后可抑制合成類固醇類藥物在尿中的排出，因而使此類藥物在尿中的濃度降低，可能不被檢出。

7.肽類激素 共4種。都是內(nèi)源性激素，使用后或可起到雄性激素作用，或可增加身體耐力，因而也被禁用。

禁用藥物除去上述這些品種外，還包括結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與這些藥物相似的物質(zhì)，所以實(shí)際禁用藥物決不限于已列出的這些，會(huì)大大超過這個(gè)數(shù)目。這些類似的藥物都做為“有關(guān)化合物”，也是禁用的，是為了防止運(yùn)動(dòng)員取巧，服用新發(fā)明的某些藥物?！?nbsp;

檢測(cè)手續(xù)

興奮劑檢測(cè)都是通過尿樣的分析來進(jìn)行的。被檢查的運(yùn)動(dòng)員一般是獲得了名次的，對(duì)未獲名次的則是隨機(jī)選擇。比賽結(jié)束后一個(gè)小時(shí)內(nèi)，被選中的運(yùn)動(dòng)員需去取樣站報(bào)到，有專人伴隨左右，直至取得尿樣為止。一般需取尿樣至少75ml，分裝兩個(gè)瓶內(nèi)，一瓶裝約50ml，稱為A樣，另一瓶裝25ml，稱為B樣。將A樣與B樣密封、編號(hào)，再裝入一個(gè)袋中，密封，冷凍保存，送往檢測(cè)中心分析。在分析時(shí)，先用A樣進(jìn)行，應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)得出結(jié)果，如查出尿樣中有禁用藥物，則由檢測(cè)中心通知組織委員會(huì)，再通知運(yùn)動(dòng)員及其所在體育隊(duì)隊(duì)長、隊(duì)醫(yī)。大家會(huì)同當(dāng)面取出B樣再進(jìn)行分析復(fù)審，如仍檢測(cè)出有禁用藥物，則由醫(yī)學(xué)委員會(huì)討論決定采取措施。

由于服用藥物影響運(yùn)動(dòng)員的聲譽(yù)，所以檢測(cè)工作要求極嚴(yán)格，并采取嚴(yán)密的保安措施，以防止各種弄虛作假的欺騙行為?！?nbsp;

四 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的資格

對(duì)檢測(cè)興奮劑的實(shí)驗(yàn)室，國際奧委會(huì)有一套規(guī)定的申請(qǐng)手續(xù)與方法，經(jīng)測(cè)試合格后，才有資格進(jìn)行這項(xiàng)工作，其所發(fā)出的分析結(jié)果報(bào)告才被認(rèn)為有效?，F(xiàn)在的規(guī)定是：如欲承擔(dān)某國際性比賽的興奮劑檢測(cè)，必須在比賽前一年通過正式考試，而在參加正式考試前的半年至一年內(nèi)，要先通過3次預(yù)考試。每次考試須分析10個(gè)未知尿，并在24小時(shí)內(nèi)得出正確結(jié)果。如有一個(gè)不正確，須重新補(bǔ)做2個(gè)未知樣品并得出正確結(jié)果。如只做對(duì)7個(gè)考試尿樣，則作不及格論，須過一年后再行申請(qǐng)考試。

考試合格的實(shí)驗(yàn)室的有效工作期限為一年，翌年初須進(jìn)行復(fù)核。復(fù)核時(shí)要分析8個(gè)未知尿樣，并得出正確結(jié)果，做錯(cuò)1個(gè)時(shí)，可補(bǔ)加2個(gè)未知樣品。如上所述，如復(fù)核不能通過，則該實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)資格即被取消。

國際奧委會(huì)醫(yī)學(xué)委員會(huì)對(duì)申請(qǐng)興奮劑檢測(cè)資格考試的實(shí)驗(yàn)室首先要對(duì)其人員組成、業(yè)務(wù)能力、過去成就、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、所用興奮劑檢測(cè)方法、禁用藥物標(biāo)準(zhǔn)品、禁用藥物陽性尿、原型藥物和必要的代謝物的氣相色譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)等等進(jìn)行審查，認(rèn)為合格后才同意其申請(qǐng)。較困難的是標(biāo)準(zhǔn)品的收集和陽性尿的取得，因?yàn)榻盟幬锸鞘澜绺鞯厣a(chǎn)的、需通過多種渠道才能收集完全；有些藥物還需要特殊許可才可攜帶或運(yùn)輸郵寄。陽性尿的取得則要有自愿服用這些藥物的人按時(shí)收集尿液，作為檢測(cè)時(shí)的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)。除了用運(yùn)動(dòng)員的尿樣分析結(jié)果來確證其是否服用某藥物外，同時(shí)要有此藥物的標(biāo)準(zhǔn)品、陽性尿和空白尿的色譜和質(zhì)譜圖譜，共同對(duì)照比較。當(dāng)尿樣與標(biāo)準(zhǔn)品和陽性尿的數(shù)據(jù)完全相同時(shí)才可確證。　

五 檢測(cè)步驟

尿樣由專人送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室后，需登記、編號(hào)，并測(cè)量某些基本數(shù)據(jù)，如pH、比重、顏色、體積及有無沉淀等。然后將尿樣分取數(shù)份，按組進(jìn)行篩選，若篩選中查出有違禁藥物，則需進(jìn)一步確證其存在。

色譜方法是較理想的檢測(cè)手段。1967年報(bào)道的刺激劑系統(tǒng)檢測(cè)方法分為三步：第一步為篩選，第二、三步為確證。用兩種提取方法以氣相色譜法（GC）、薄層色譜法（TLC）進(jìn)行分離鑒定，使用了4種GC填充柱系統(tǒng)，氫焰離子化檢測(cè)器，可檢出40種興奮劑。其后隨著色譜技術(shù)的發(fā)展及禁用藥物的增加，檢測(cè)方法也相應(yīng)地不斷改進(jìn)。1972年采用了程序升溫方法，并用氮磷檢測(cè)器檢測(cè)。1976年使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用手段檢測(cè)甾體，1980年開始用毛細(xì)管氣相色譜法檢測(cè)，至1984年大體基本定型，并增加了用高效液相色譜法檢查幾種特定藥物及咖啡因定量等工作。1988年增加了2類藥物，β-阻斷劑多用氣相色譜法檢出，利尿劑則用高效液相色譜法檢測(cè)。目前一般按興奮劑類別分為4組或5組進(jìn)行。各實(shí)驗(yàn)室所用方法的原理大同小異，具體試驗(yàn)條件則根據(jù)自己的具體情況而有所不同。檢測(cè)的第一步是篩選，如未查出任何禁用藥物即做為陰性尿，不再考慮；如查出有禁用藥物存在，則仍需進(jìn)一步分析，稱為“確證”。現(xiàn)以我們?cè)诘谑粚脕嗊\(yùn)會(huì)所用的檢測(cè)方法為例，說明如下：

1.篩選方法

尿樣送到試驗(yàn)室后，分別取數(shù)毫升放小試管內(nèi)，分交各組進(jìn)行篩選實(shí)驗(yàn)。共分為：揮發(fā)性含氮化合物組、難揮發(fā)含氮化合物組、利尿劑及特殊結(jié)構(gòu)化合物組、甾體同化激素組。

（1）揮發(fā)性含氮化合物組 主要檢測(cè)刺激劑。這類藥物多以游離形式排出，其檢測(cè)流程如圖1，所用氣相色譜條件列于表3。

（2）難揮發(fā)含氮化合物組 主要檢測(cè)麻醉鎮(zhèn)痛劑和β-阻斷劑。這兩類藥物多以結(jié)合形式排出，因此需先水解，使之游離，再進(jìn)行衍生化后檢測(cè)，其方法流程如圖2，色譜條件如表4所示。 

表3氣相色譜操作條件

表4 氣相色譜操作條件

（3）利尿劑組藥物經(jīng)提取后用高效液相色譜法分析檢測(cè)，此組同時(shí)檢測(cè)2種興奮劑，咖啡因和匹莫林，檢測(cè)程序和色譜條件分別見圖3和表5。

表5　 液相色譜操作條件

 

（4）甾體同化激素組 此類藥物有的以游離形式，有的以結(jié)合形式排出，我們所用的方法為同時(shí)檢測(cè)。其流程和色譜條件如圖4和表6所示。

表6 氣-質(zhì)聯(lián)用操作條件

2.確證方法

經(jīng)篩選判為陽性的尿樣，需進(jìn)一步加以確證，根據(jù)規(guī)定，確證結(jié)果須給出藥物或其代謝物的質(zhì)譜圖，因此在確證方法中均使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，確證時(shí)的分組同篩選方法中所述。

（1）揮發(fā)性含氮化合物組方法同篩選，最后之提取物濃縮后進(jìn)樣于GC/MSD。色譜條件見表7。

表7　 氣-質(zhì)聯(lián)用操作條件

  

（2）難揮發(fā)含氮化合物組方法同篩選，最后之衍生化產(chǎn)物取小量進(jìn)樣于GC/MSD。色譜條件見表8。

表8　 氣-質(zhì)聯(lián)用操作條件
 
 

（3）利尿劑組此組藥物需衍生化，然后進(jìn)樣于GC/MSD。方法見圖5（a，b）色譜條件見表9。

表9氣-質(zhì)聯(lián)用操作條件
 
 

（4）甾體同化激素組 方法均同篩選，唯最后得出全質(zhì)譜圖作為確證。

現(xiàn)代的興奮劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室多采用自動(dòng)化程度較高的儀器，并由計(jì)算機(jī)控制，可以自動(dòng)進(jìn)樣，提高準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，并可編制檢測(cè)程序，大大方便了此項(xiàng)工作。

需要提出的是禁用藥物中的肽類激素藥物是1990年以后才提出的，目前還沒有很好的檢測(cè)方法，同時(shí)因?yàn)樗鼈兌际侨梭w內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì)，在分析方法和數(shù)據(jù)積累、限量等方面還需要做更多的工作才能訂出較合適的標(biāo)準(zhǔn)。　 

六　 我國的興奮劑檢測(cè)工作

為迎接1990年第十一屆亞運(yùn)會(huì)在北京召開和承擔(dān)運(yùn)動(dòng)員尿樣的檢測(cè)工作，于1986年9月由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所和國家體委體育科學(xué)研究所協(xié)作，共同籌建我國的興奮劑檢測(cè)中心。經(jīng)過三年的努力，1989年3月開始，接受了IOC醫(yī)學(xué)委員會(huì)興奮劑和體育生化分委會(huì)的三次預(yù)考和兩次水平考試，共38個(gè)未知尿樣均獲得了準(zhǔn)確結(jié)果，順利通過。于1989年11月正式考試，分析10個(gè)未知尿樣，又按時(shí)得出全部正確結(jié)果，同年12月8日，IOC副主席、IOC醫(yī)學(xué)委員會(huì)主席Alexandre de Merode親王寫信給中國興奮劑檢測(cè)中心，正式通知確認(rèn)其為合格的興奮劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。因此我國成為當(dāng)時(shí)世界上第20個(gè)、亞洲第3個(gè)合格的實(shí)驗(yàn)室，可以獨(dú)立承擔(dān)各種運(yùn)動(dòng)比賽的興奮劑檢測(cè)工作。此后每年復(fù)試也都合格，一直保持了此資格?，F(xiàn)在該檢測(cè)中心設(shè)在國家體委運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究所內(nèi)。