高效液相色譜儀操作三要點(diǎn)

　　2、被測樣品

　　液相系統(tǒng)中的第二個顆粒物來源是被測樣品。一些實(shí)驗(yàn)室在將他們的樣品放置在自動進(jìn)樣器盤（或手動進(jìn)樣）以前，所有樣品都先通過一個0.45 μm針筒式過濾器過濾。這是一個有效除去被測樣品中顆粒物的方法。但是這個過程也有一點(diǎn)需要關(guān)注：你使用了針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會有或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等。如果有丟失，過濾后液體中被測物的含量或濃度與原基本樣液的含量或濃度還相同嗎？這個問題一般需要通過實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。確認(rèn)這步是要增加工作量和費(fèi)用的。過濾器的使用是一種消耗，每個過濾器的價格從幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時，由于基質(zhì)大多比較復(fù)雜，所以過濾這步已成為不可或缺的一步。在實(shí)際分析工作中，一般檢測每一組樣品會帶一個外標(biāo)、一個添加回收或是質(zhì)控樣品，所以，只要最終檢測時得到的信噪比能滿足檢出限要求，可將這步視為系統(tǒng)誤差而忽略。

　　3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物

　　最后，在HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。

　　第一種建議認(rèn)為，在一般實(shí)驗(yàn)室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于上述觀點(diǎn)制定定期預(yù)防性維護(hù)計劃。該觀點(diǎn)認(rèn)為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費(fèi)用相比，更換密封墊的費(fèi)用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網(wǎng)，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動相流至柱頭。若有這種裝置應(yīng)查閱輸液泵操作手冊，查看推薦的這種過濾器清洗或更換的間隔。

　　另一種建議則認(rèn)為，原裝密封墊的密封效果最好，更換以后容易引起流動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。

　　兩種說法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。

　　自動進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)軸的密封隨著使用時間也會磨損，但是在我的經(jīng)驗(yàn)中，即便是高負(fù)荷的運(yùn)轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動進(jìn)樣器系統(tǒng)有計數(shù)進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)動次數(shù)的功能，你可以設(shè)定一個警鈴當(dāng)預(yù)設(shè)閥轉(zhuǎn)動次數(shù)已達(dá)到時提醒你。曾有一種說法，進(jìn)樣器最多轉(zhuǎn)動20，000次，這僅僅是進(jìn)樣10000個；但這似乎不是實(shí)驗(yàn)室涉及的常規(guī)樣品分析使用壽命，它們的實(shí)際使用壽命會更長。旋轉(zhuǎn)軸密封磨損后會滲液，比較明顯的特征是同一樣品多次進(jìn)樣后，峰面積值差別比較大（RSD》5%）。當(dāng)然，輸液泵的密封墊和旋轉(zhuǎn)軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動相中，加速對這些部件的損傷。此外，如果你日常運(yùn)行的流動相有緩沖鹽，如磷酸緩沖鹽，密封墊的磨損會更快。

　　無論顆粒物源于何物，實(shí)驗(yàn)時都要將其除去。推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個0.45或0.5 μm的在線多孔過濾器，接在自動進(jìn)樣器和柱子之間，即使已使用了保護(hù)柱。這個在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便（幾分鐘就可更換）。若采用在線過濾，HPLC系統(tǒng)檢測每批樣品開始前記錄下壓力值，當(dāng)壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應(yīng)該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復(fù)到原來的壓力值。

　　三、沖洗

　　使HPLC系統(tǒng)良好運(yùn)行的第三個要點(diǎn)是保持系統(tǒng)的清潔。你需要關(guān)注流動相流經(jīng)該系統(tǒng)的所有地方，對于這些地方經(jīng)常性的沖洗，將使你的系統(tǒng)保持在“Ready”狀態(tài)。

　　1、流動相儲液瓶

　　首先要經(jīng)常清洗流動相儲液瓶，或者每做一批新樣品更換一次流動相。一個臟的儲液瓶將會污染注入的流動相。建議儲液瓶中緩沖液使用時間不要超過一周，而有機(jī)溶劑使用時間不要超過一個月。也有人建議儲液瓶中保持用溶劑充滿，直到更換分析方法儲液瓶需更換新溶劑（流動相組成發(fā)生變化）時，將舊溶劑倒掉更換新溶劑，這樣勝于將溶劑用完。但這對于分析樣品量少的實(shí)驗(yàn)室而言似乎有些浪費(fèi)。儀器公司的工程師建議儲水瓶的水要天天換，每周瓶子還應(yīng)該用異丙醇清洗一次。有的實(shí)驗(yàn)室則在水里加入0.1～1 mM的甲酸抑制微生物的生長。這些做法看起來有些繁瑣，但卻能起到“磨刀不誤砍柴工”作用。

　　2、泵

　　接下來要沖洗的是泵。千萬不要一分析完沖幾分鐘后就停泵，特別是當(dāng)流動相中含有難揮發(fā)的緩沖液（如磷酸鹽）時。如果儀器不是連續(xù)使用，當(dāng)流動相蒸發(fā)時，難揮發(fā)物就會粘在活塞密封墊的表面，難揮發(fā)物將形成固形物沉淀。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以，無論使用長短，在停泵以前一定要用非緩沖液流動相沖洗泵在半個小時以上，要是流動相中有難揮發(fā)緩沖鹽則建議沖洗的時間應(yīng)該更長些。

　　3、自動進(jìn)樣器

　　自動進(jìn)樣器也要按規(guī)定清洗?，F(xiàn)在的儀器多配有自動進(jìn)樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時更換、補(bǔ)充沖洗液即可。自動進(jìn)樣器用的洗滌液也要采用與流動相相同的方式處理，并根據(jù)溶劑的有效期和規(guī)定，清洗儲液瓶或更換洗滌液?，F(xiàn)在的自動進(jìn)樣器設(shè)置、操作都很簡單，如果時間允許（特別是利用夜間運(yùn)行），每次分析完后設(shè)置進(jìn)1、2針純?nèi)軇ㄈ缂状?、乙腈），也是一個好做法。

　　4、色譜柱

　　對柱子的污染是隨使用時間而增加。通常表現(xiàn)是：運(yùn)行走基線時在記錄的色譜圖中基線噪音增加，泵壓也增加。解決這個問題的最有效方法就是在每一批樣品分析結(jié)束后或準(zhǔn)備卸下柱子時用大量的流動相沖洗柱子（例如，甲醇、乙腈和水）。用梯度沖洗效果更好，具體的比例要根據(jù)柱子的說明書和性質(zhì)而定。

　　5、檢測器

　　如果是正常使用，檢測器將依據(jù)其性質(zhì)并按照說明書規(guī)定進(jìn)行洗。例如UV/VIS檢測器或FL檢測器，在對柱子和系統(tǒng)進(jìn)行沖洗時也就一同對檢測器流通池中污染物進(jìn)行了清洗。但是蒸發(fā)光檢測器或質(zhì)譜儀則需要按照說明書進(jìn)行定期清洗。這些檢測器在使用時會有難揮發(fā)污染物沉積，如質(zhì)譜儀離子源的噴針、毛細(xì)管、錐孔板、預(yù)四極等部件，因而需要定期清洗。而且對聯(lián)有這些檢測器的系統(tǒng)沖洗時，最好與這些檢測器斷開，以減少對檢測器的污染。

　　總之，實(shí)驗(yàn)室日常使用的液相色譜儀要是能認(rèn)真做好這三項(xiàng)工作——脫氣、過濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預(yù)防性維護(hù)，使用時就會感到比較順手。當(dāng)然，在實(shí)際操作時遇到的問題并沒有這么簡單，但這三個良好習(xí)慣將是正確操作、使用HPLC系統(tǒng)的基礎(chǔ)。