一招變身檢測熒光達(dá)人
讓我們再來看一個激發(fā)塊的光譜圖:
上圖為olympus U-FGW激發(fā)塊的光譜信息,可以看出此激發(fā)塊可以提供的激發(fā)光在530-560nm左右,允許透過的熒光光譜范圍在570nm以上,所以此激發(fā)塊并不適合DAPI激發(fā)。如果用此激發(fā)塊來做DAPI的觀察,就會出現(xiàn)看不到熒光的現(xiàn)象。
可見,要選擇合適的熒光激發(fā)塊,我們首先要知道熒光染料激發(fā)和發(fā)射光的波長特性和激發(fā)塊光譜的各項數(shù)據(jù)。但是,熒光染料和濾色片的種類非常多,用戶往往沒有渠道來獲取這些信息。在實(shí)際實(shí)驗中使用熒光顯微鏡時,因為熒光激發(fā)塊配置錯誤而得不到好的觀察效果的現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生,對于用戶來說是一件非常煩惱的事。
為了方便用戶正確選擇激發(fā)和發(fā)射波長,節(jié)省時間,日本理化研究所腦科學(xué)所-奧林巴斯合作中心(the RIKEN BSI-Olympus Collaboration Center : http://rikenbocc.brain.riken.jp/index_e.html)開發(fā)了軟件Spectrum Manager。用戶選擇熒光染料,軟件會給出染料的光譜信息和推薦的濾色片選擇等信息,使用非常方便。
還可利用Data Manager自行對光源信息、染料數(shù)據(jù)庫或濾色片信息進(jìn)行更新。
此款軟件已經(jīng)整合至奧林巴斯共聚焦顯微鏡的一款軟件中,發(fā)布以來得到了用戶非常好的反響。因此,現(xiàn)將該軟件開放給所有顯微鏡使用者,供大家免費(fèi)使用。
下載地址:http://cn.olympus.com/smkx_second/second.aspx?nodeid=187page=ContentPagecontentid=1011
由于是針對共聚焦顯微鏡的軟件,所以軟件中僅提供了激光光源譜線。如果您有需要,也可以將汞燈和氙燈光源信息導(dǎo)入至軟件。
以下提供普通熒光顯微鏡常用的汞燈和氙燈光源的圖譜,供大家參考。
汞燈在313, 334, 365, 406, 435, 546, and 578nm有比較好的激發(fā)峰。
氙燈在可見光光譜范圍內(nèi)強(qiáng)度更穩(wěn)定(沒有像汞燈那樣的光譜峰值),在紅外波段比汞燈強(qiáng)度高。但在紫外波段有一定的缺陷性。
所以選擇光源時,光源特性要與我們的具體應(yīng)用相匹配。
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